Método de concentración por sedimentación de Ritchie

Método de concentración por sedimentación de Ritchie 

FUNDAMENTO:

Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda del formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Soluciones:

·         Solución salina isotónica

·         Solución de formaldehido al 10%

·         Éter

MATERIAL:

·         Centrifuga

·         Tubos de ensaye cónicos 15 ml.

·         Gasas cortadas en cuadros

·         Embudos pequeños de cristal

·         Vasos de precipitado 50 ml.

·         Aplicadores de madera

·         Abate lenguas

·         Pipetas Pasteur con bulbo

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         Microscopio

MÉTODO:

1)  Se coloca un poco de materia fecal en el vaso de precipitado aproximadamente 1 g. o empíricamente el tamaño de una nuez pequeña esta se coloca con ayuda del abate lengua, se añaden 10 ml. De solución salina y esta se mezcla.

2 ) Se filtra la suspensión a  través de la gasa colocada en el embudo esta doblada en 4 partes, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.

3) Se centrífuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm., se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con la solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más. 

4)  Al último sedimento se agregan 5 ml de solución de formaldehido al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10 min.

5)  Se añaden después 0.5 ml. De éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente durante 30 segundos.

6)  Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm.

7)  Después de centrifugar se observan 4 capas:

·         Éter superficial

·         Restos fecales

·         Formaldehido

·         Sedimento en el fondo del tubo.

8)  Se decanta el sobrenadante, se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se  extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.

9)   Se le añade una gota de yodo lugol y este se cubre con el cubre objetos de manera  que se puede observar que estos se homogenizan.

10) Estos se observan en el microscopio con el objetivo seco débil (10X) y seco fuerte  (40X).

Observaciones:

Logre observar solo grasas y fibras, aunque tal vez podríamos haber encontrado algo
diferente porque yo creo que la muestra daba para más solo que nos falto tiempo.
Espero que la próxima vez si encontremos ya algo. Este método también fue muy fácil de
realizar y pude darme cuenta que todo método tiene su objetivo, me gusto mucho
hacerlo.

Referencias Bibliográficas: 

http://aline-monserrat.blogspot.mx/2011/09/metodo-de-concentracion-por.html